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KUBOTA久保田8730操作及維護
 
離心機是常見的實驗室設(shè)備,它可以通過高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的離心力場對不同沉淀系數(shù)的混合物進行快速分離、濃縮和提純。被廣泛應(yīng)用于生物物理、生物化學(xué)、醫(yī)療衛(wèi)生、石油化工、地質(zhì)、農(nóng)、林、牧等科研、生產(chǎn)部門,它可對生物細胞、病毒、血清、蛋白等有機物,無機物溶液,懸浮液及膠體溶液、納米材料等樣品進行分離、濃縮、提取、制備等工作 [1-2]。
河南科技學(xué)院實驗中心在 2006 年購進了美國貝克曼庫爾特公司 J-25 落地式高速冷凍離心機和L-100K 制備型超速離心機各 1 臺,設(shè)計的軟件可模擬不同的分離實驗,節(jié)省摸索條件的時間及寶貴的樣品。無論是對于蛋白組學(xué)、基因組學(xué)還是細胞組學(xué)的研究,Beckman  Coulter  Optima  L 超速離心機都可配合不同的轉(zhuǎn)頭使用,集真空、高速和冷卻于一體,可以用于大量的細胞、亞細胞器、細菌及病毒的快速分離,從而完成各種核酸、蛋白、細胞和納米材料的分離工作,可滿足我院動物科學(xué)、食品科學(xué)、
生命科學(xué)等相關(guān)專業(yè)實驗人員的實驗需求?,F(xiàn)就儀器性能、配置、操作、應(yīng)用等方面對 J-25 落地式高速冷凍離心機和 L-100K 制備型超速離心機做簡單介紹,以及近年來對離心機的操作和維護經(jīng)驗的總結(jié), 以便實驗人員在今后教學(xué)科研實驗中提高離心機使用效率,為實驗室的建設(shè)和發(fā)展發(fā)揮更大作用。
KUBOTA久保田8730

1 KUBOTA8730高速冷凍離心機

1.1 主要技術(shù)指標

最大轉(zhuǎn)速 / 離心力:25000r/min,75600g;最大容量:6×500mL;離心時間:0 ~ 3h 或連續(xù)離心;溫度范圍:-20℃~ 40℃,1℃步進;速度控制范圍: 100 ~ 25000r/min 速度設(shè)定;速度控制精度:設(shè)定速度 10r/min[3]。

1.2 儀器配置

JA-25.50  定   角   轉(zhuǎn)   頭,25000r/min,75600g,
 
離心管 8×50mL;JA-10 定角轉(zhuǎn) 頭,10000r/min, 17700g,離心管 6×500mL;JS-5.9 多功能酶標板轉(zhuǎn)頭,5900r/min,6570g,酶標板 10plates。

1.3 操作規(guī)程

(1) 打開電源:按 POWER 開關(guān),打開電源, 踩底部腳踏板,打開離心機倉門蓋;
(2) 樣品平衡:將樣品倒入離心管,連同離心管蓋子一起置托盤天平中左右平衡(或者用電子天平準確稱量),蓋好離心管蓋子(離心管最好七成滿, 以防太滿而外溢),若樣品管為奇數(shù)管可用蒸餾水作平衡管;
(3) 放置轉(zhuǎn)子:安裝所用型號轉(zhuǎn)子,然后將配平的離心管對稱放入轉(zhuǎn)子的對稱孔內(nèi),擰緊轉(zhuǎn)子蓋, 將手放于離心蓋上有手掌圖樣的部位,雙手向下用力向下壓,關(guān)上離心機倉門蓋;
(4) 設(shè)定離心參數(shù):旋轉(zhuǎn) ROTOR 按鈕,旋轉(zhuǎn)至 JS-5.9、JA-10 或 JA-25.50,選擇轉(zhuǎn)子型號, 旋轉(zhuǎn) SPEED 按鈕,旋轉(zhuǎn)到需要的轉(zhuǎn)速,按同樣方法設(shè)置 TIME 和 TEMP,旋轉(zhuǎn)到需要的離心時間和溫度
(如:JA-25.50,12000r/min,20min,4 ℃);其 它 鍵 的使用,按 RPM/RCF 鍵選擇速度單位(RPM 表示轉(zhuǎn) / 分,RCF 表示對應(yīng)的離心力 g 值);按 TIME/ HOLD 鍵選擇設(shè)定方式(HR:MIN,最多設(shè)定 3 小時,時間倒數(shù)計時;按 HOLD 鍵,持續(xù)離心,時間從 0 開始計時,直到按 STOP 鍵,才停止離心;按 ACCLE 鍵,加速快慢鍵;按 DECEL 鍵: 速快慢鍵;
(5) 按 START 鍵,開始離心,遇緊急情況可按 STOP 鍵停止離心機工作;
(6) 離心結(jié)束后(速度顯示為 0),打開離心機倉門蓋,取出樣品和轉(zhuǎn)子;
(7) 用干凈的沙布擦干或者自然晾干離心機腔體;
(8)0.5 ~ 1h 后,關(guān)上離心機倉門蓋,關(guān)閉電源;
(9)填寫使用記錄,管理人員簽字確認后方可離開實驗室。

1.4 應(yīng)用范圍

生物、醫(yī)學(xué)、食品衛(wèi)生、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域細胞、病毒、血清及亞細胞組份分離;蛋白、脂蛋白、核酸、RNA 梯度沉淀分離;無機物溶液、懸浮液、納米材料及膠體溶液等樣品分離、濃縮、提純等。

1.5 注意事項

(1)定期在轉(zhuǎn)子管帽螺紋上涂潤滑油,密封圈上涂真空脂;
(2) 裝樣品的離心管必須配平,對稱放入轉(zhuǎn)子。當(dāng)離心轉(zhuǎn)速達 10000-50000r/min 時,如果對稱管相差 1g,轉(zhuǎn)頭平均半徑 50mm,根據(jù)離心力公式 F=m×RCF,10000r/min 的 RCF 大約等于 6000, F=1×6000g=6kg;50000r/min 的 RCF 大 約 等 于 15000,F(xiàn)=1×150000g=150kg,這樣就引起兩邊不平衡力可達 6 ~ 150kg,這對離心機的損傷是非常大的,將大大縮短離心機的使用壽命;樣品配平誤差過大,離心機在運轉(zhuǎn)過程中將自動報警,停止運轉(zhuǎn);
(3) 安放轉(zhuǎn)子的時候,轉(zhuǎn)軸凹槽正對身體,轉(zhuǎn)子鉚釘也正對身體,雙手抱住轉(zhuǎn)子垂直放入轉(zhuǎn)軸;轉(zhuǎn)子置入離心槽,此時一定注意轉(zhuǎn)子中心內(nèi)孔的兩個梢釘應(yīng)該卡定在離心機轉(zhuǎn)動軸的正確位置上,其轉(zhuǎn)子和立軸直接的配合如下圖 1 箭頭所示;
(4) 務(wù)必擰緊轉(zhuǎn)子蓋,否則在高速離心過程中轉(zhuǎn)子容易脫離轉(zhuǎn)子軸而產(chǎn)生極大的安全隱患和危險;
(5) 離心過程中 ACCEL 和 DECEL 都默認為 MAX;
(6) 離心速度不能超過各離心轉(zhuǎn)子的最大轉(zhuǎn)速;
(7) 不同型號的轉(zhuǎn)子、離心管和管套等配件, 務(wù)必嚴格按照不同轉(zhuǎn)子說明操作使用,不能錯放, 錯配,以免損壞離心機;
(8) 離心完畢后,務(wù)必將腔體里面的水用干凈布擦干或晾干,轉(zhuǎn)子使用完畢后,必須取出;
(9)J-25 離心機專人管理,在管理員的培訓(xùn)和指導(dǎo)下操作,嚴禁擅自操作。

 

KUBOTA8730高速冷凍離心機

2.1 主要技術(shù)指標

最大轉(zhuǎn)速 / 最大相對離心力 100000r/min, 802400g,轉(zhuǎn) 速 精 度 為 ±20r/min;溫 度 設(shè) 定  
0 ~ 40℃,1℃步進;熱敏電阻和紅外檢測雙控傳感器監(jiān)控溫度,準確度 ±0.3℃,自動樣品超溫保護在 1℃以內(nèi);0 ~ 999h 或連續(xù)離心;半導(dǎo)體固體制冷;機械泵和油擴散泵,真空度 0.13Pa 壓力以下 [4]。

2.2 儀器配置

100Ti 定角轉(zhuǎn)頭 100000r/min,802400g,離心管
8×6.5mL;70Ti 定 角 轉(zhuǎn) 頭 70000r/min,504000g,離心管 8×39mL;SW41Ti 水平轉(zhuǎn)頭 41000r/min, 288000g,離心管 6×13.2mL;

2.3 操作規(guī)程

(1) 按  POWER  鍵,打開離心機電源,預(yù)熱 0.5h左右;
(2) 樣品平衡:將樣品用一次性注射器緩慢加入專用離心管,然后連同離心管管帽放入電子天平中準確稱量,用熱合器封住離心管口,蓋上離心管管帽,再準確稱量一遍,若樣品管為奇數(shù)管可用蒸餾水作平衡管;
(3) 安裝所用型號轉(zhuǎn)子,對稱放入離心樣品的離心管,擰緊轉(zhuǎn)子蓋,關(guān)上離心機倉蓋;
(4) 輸入離心數(shù)據(jù),編寫離心程序,按SPEED 鍵,輸入所需轉(zhuǎn)速,按 ENTER 鍵確認,按同樣方法設(shè)置 TIME 和 TEMP(如:100Ti,90000r/min,6h,4℃);
(5) 按START 鍵,開始離心,當(dāng)真空度抽到< 20
(750,200,20),離心速度達到設(shè)定轉(zhuǎn)速,方可離開離心機;
(6) 速度顯示為  2900r/min  后,按VACCUM鍵放真空,打開離心機倉蓋,取出樣品和  轉(zhuǎn)子;
(7) 用干凈的布擦干或者自然晾干離心機腔體;
(8)0.5 ~ 1h 后,關(guān)上離心機倉門蓋,關(guān)閉電源;
(9)填寫使用記錄,管理人員簽字確認后方可離開實驗室。

2.4 應(yīng)用范圍

分子生物學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)、基因組學(xué)等研究中亞細胞組分,病毒、核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子的分離、濃縮、提純;蔗糖 / 氯化銫密度梯度離心法(density  gradient  centrifugation   method) 純 化病毒。

2.5 注意事項

(1) 離心管的樣品務(wù)必配平,誤差不超過體積的 1%,然后對稱放入轉(zhuǎn)子,離心管要對稱同量、同液、滿管放置,嚴禁半管和空管運轉(zhuǎn);
(2) 務(wù)必擰緊轉(zhuǎn)子蓋;
(3) 水平轉(zhuǎn)子對號入座,不能錯放;SW41Ti 轉(zhuǎn)子 6 個吊籃必須全掛上,對號入座,輕微晃動檢查是否掛好;
(4) 離心過程中 ACCEL 和 DECEL 都默認為
MAX;
(5) 離心開始離心機自動開始抽真空,離心結(jié)束后,需要按 VACCUM 鍵放真空;
(6) 離心速度不能超過各個轉(zhuǎn)子的最大轉(zhuǎn)速;
(7) 不同型號的轉(zhuǎn)子、離心管和管套等配件,務(wù)必嚴格按照不同轉(zhuǎn)子配套說明操作使用,不能錯放, 錯配,以免損壞離心機;
(8) 離心完畢后,務(wù)必將腔體里面的水布擦干,轉(zhuǎn)子使用完畢后,必須取出;
(9)L-100K 超速離心機嚴格按照離心機操作規(guī)程使用,專人管理專人操作,嚴禁擅自操作。
(10)送樣人要向操作者說明所離心的溶液是何種溶液,操作者要作詳細詢問記錄,嚴禁離易燃、易爆以及易腐蝕樣品。

3 日常維護

(1) 離心機不常用時,必須做到每月至少要開機一次,放一個轉(zhuǎn)子低轉(zhuǎn)速(3000 ~ 5000r/min)運行 30min,以保證離心機運轉(zhuǎn)正常 [1,5];
(2) 絕對不允許超過轉(zhuǎn)子的最大轉(zhuǎn)數(shù)、能承受的最大離心力和最大允許速度使用;不能在高速運轉(zhuǎn)時使用低速度轉(zhuǎn)子 [6];轉(zhuǎn)子達到使用壽命,必須降級或減速使用 [1];
(3) 絕對不允許不平衡運行離心機。樣品務(wù)必在離心管重量平衡后對稱放入轉(zhuǎn)子內(nèi),否則在非對稱的情況下負載運行,就會使軸承產(chǎn)生離心偏差,引起離心機劇烈振動,嚴重的會使離心機轉(zhuǎn)軸斷裂。在超速離心使用 SW41 水平轉(zhuǎn)子時,離心管務(wù)必要求對號入座,平衡后務(wù)必按對應(yīng)的號碼對稱放入離心管,一定要檢查 6 支離心管是否掛牢;離心管也專機使用,不能混用,否則會損傷轉(zhuǎn)頭;
(4) JA-10 轉(zhuǎn)頭在使用離心管套時,必須全部裝入轉(zhuǎn)子內(nèi)。平衡時應(yīng)帶上管套,離心管套專機使用, 不能在不同型號離心機之間混用;
(5) 離心時將離心腔門或蓋子關(guān)好以及把轉(zhuǎn)子蓋子擰緊,離心完畢后,必須將轉(zhuǎn)頭取出,擦拭或者清洗干凈,放置在干燥通風(fēng)的地方晾干,擦干或者自然晾干離心機腔體,關(guān)好離心機蓋;
(6)L-100K 超速離心機開機后,轉(zhuǎn)速還未達到預(yù)置轉(zhuǎn)速時,操作者不要離開離心機,直到運轉(zhuǎn)正常方可離開,要隨時觀察運行情況;
(7) 要定期給 L-100K 超速離心機真空泵、擴散泵換油,使真空系統(tǒng)正常運行;
(8) 定期給離心轉(zhuǎn)軸涂抹潤滑脂,密封圈上涂真
空脂,磨損過度的墊圈立即更換。離心機腔體蓋邊緣涂抹真空脂,防止密封圈老化,應(yīng)定期檢查有無變形;
(9) 定期檢查 L-100K 超速離心機轉(zhuǎn)子底部識別轉(zhuǎn)速的花盤是否有損傷和劃痕,如果在安裝的過程中有損傷和劃痕,就會出現(xiàn)轉(zhuǎn)數(shù)上不去的現(xiàn)象, 就需要及時更換花盤。
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